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    血栓分子标志物检测及临床应用

    日期:2017-12-25 18:21:57 来源: 积水潭医院检验科 点击:
    一、概述

        人体内出凝血系统是一个非常庞大且繁杂的系统,机体通过凝血、纤溶、血小板、内皮四个系统的参与时刻维持着动态平衡。促凝与抗凝活性的失衡将直接导致血栓性疾病与出血性疾病的发生,且血栓性疾病更常见。目前实验室凝血常规检测项目,如PT、APTT、TT、Fbg、D-二聚体、FDP、抗凝血酶、凝血因子等已涵盖凝血、纤溶等系统,但都属于在血栓形成后的被动检测、晚期筛查项目,对血栓前状态、Pre-DIC等疾病不敏感,同时对于溶栓治疗监测不能在第一时间反馈效果。
        血栓分子标志物(TAT、PIC、TM、tPAI-C)与D-二聚体、FDP联合检测,可在早期更加敏感、可靠的向临床反馈血栓的发生与形成、术后血栓与出血情况的监控、Pre-DIC的状态、溶栓治疗的效果、血管内皮系统损伤等情况。

    二、临床意义

        注:TAT:凝血酶抗凝血酶复合物;PIC:纤溶酶-抗纤溶酶复合物;TM:血栓调节蛋白;t-PAIC:组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活抑制复合物;AT:抗凝血酶;PC:蛋白C;PS:蛋白S;APC:活化的蛋白C;FV/FⅧ:凝血因子V/Ⅷ;α2-PI:a2-纤溶酶激活抑制物;t-PA:组织型纤溶酶原激活物;PAI:纤溶酶激活抑制物;FDP/DD:纤维蛋白(原) 降解产物/D-二聚体;PAF:血小板活化因子;vWF:Vonwilebrand因子

    1、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)
        凝血酶生成是静脉血栓形成的关键环节,它作用于纤维蛋白原使其转变为纤维蛋白而形成血栓。但凝血酶在血液中半衰期不到1分钟,会很快被抗凝物质中和,因此直接检测凝血酶非常困难。而作为凝血酶与抗凝血酶1:1结合形成的复合物,TAT可作为凝血酶生成的分子标志物,直接证实凝血系统的活化。
    正常参考区间:0-4.0ng/mL
    TAT升高见于:
       1) DIC,DIC前期状态
       2) 深静脉血栓(DVT),肺栓塞(PE)
       3) 某些心房颤动,与二尖瓣狭窄相关的心房颤动
       4) 其他凝血系统激活状态
    2、组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂复合物(tPAI-C)
        当凝血活化,纤维蛋白形成后可以激活组织型纤溶酶原激活剂(t-PA),活化的t-PA进一步激活纤溶酶原转化为纤溶酶,后者降解纤维蛋白形成D-二聚体。组织型纤溶酶原激活剂抑制剂PAI-1是t-PA的生理性抑制剂,二者1:1形成复合物即tPAI-C后,t-PA激活纤溶酶原的活性被抑制,进而抑制纤维蛋白降解。tPAI-C水平与t-PA浓度及血管内皮损伤程度呈正相关,是评估两者的直接标志物。
    正常参考区间:男性:0-17ng/mL
                  女性:0-10.5ng/mL
    tPAI-C升高见于:
       1) DIC 
       2) 血管内皮损伤
       3) 各种动脉和静脉血栓形成(DVT、急性心肌梗死等)
    3、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PIC)
        纤溶酶是纤溶系统的重要组成部分,活化的纤溶酶半衰期极短,仅仅几秒钟,体内不易测定,纤溶酶生成后迅速与α2纤溶酶抑制剂1:1结合形成复合物,纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PIC)的出现直接反应纤溶酶的生成,可用于纤溶类疾病的辅助诊断及疗效观察。
    正常参考区间:0-0.8ug/mL
    PIC升高见于:
       1) DIC, DIC前期状态
       2) DVT,PE
       3) 在溶栓治疗的给药过程中(t-PA,尿激酶)
       4) 其他纤溶激活状态
    4、血栓调节蛋白(TM)
        血栓调节蛋白(TM)是1981年首次由Esmon等确认并提出的一种存在于细胞膜表面的跨膜糖蛋白,TM大多出现在动脉、静脉、毛细血管和淋巴管的内皮细胞表面,可以辅助凝血酶激活蛋白C系统产生抗凝效果。当内皮细胞发生病变或受损时,常引起TM的表达、分泌异常、释放入血,从而引起TM含量变化,因此可作为内皮细胞损伤的标志物。
    正常参考区间:3.8-13.3TU/mL
    TM升高见于:
       1) 自身免疫性疾病:SLE等
       2) DIC
       3) 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)
       4) 血管内皮损伤
        TAT对于DIC、DVT等引起高度凝血激活的病理状态,是敏感标志物,已列入2014年日本血栓止血学会暂定的DIC诊断标准。但对于进行华法林等抗凝治疗的患者,无法发现低凝水平的血栓形成,因此不宜作为血栓监测指标,而是作为抗凝效果的指标。tPAI-C和PIC代表纤溶系统活化,具有很好的血栓诊断意义,原因可能在于其存在反映了纤维蛋白的生成(血栓形成),因此可以成为静脉血栓形成良好的监测指标。而纤溶的下游产物FDP和D-二聚体易受到底物量、血栓部位、血循环、代谢等因素影响,特异性较低。

    三、检测原理

        以TAT为例,本检测采用化学发光免疫分析两步法定量检测凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)。生物素化凝血酶单克隆抗体(小鼠)与被检样本中的TAT 发生特异性反应,再与链霉亲和素磁微粒结合。去除未反应物质后,加入碱性磷酸酶(ALP)标记的抗凝血酶Ⅲ单克隆抗体(小鼠)与磁微粒上的TAT 发生特异性反应。再次去除未反应物质后, 添加发光底物经磁微粒上的ALP 分解并发光,测定其发光强度。发光强度随被检样本中TAT浓度的增加而增加。如图2。

    四、主要参考文献

       1.阮长耿.出血与血栓性疾病的诊断和治疗进展.临床血液学杂志,2010,23(1):1-4.
       2.Su EP, Chatzoudis N, Sioros V, et al. Markers of thrombin generation during resurfacing and noncemented total hip arthroplasty: a pilot study[J]. Clin Orthop Relat Res, 2011,469(2):535-540. DOI:10.1007/s11999-010-1659-z.
       3.孟英,刘建龙,吴俊,等.应用凝血标志物诊断创伤骨科术后静脉血栓形成的病例对照研究[J].中华检验医学杂志,2016,39(10):751-755.

    (责任编辑:sgx)

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